暗视野显微镜原理及遮光片的制作

暗视野显微镜

1. 原理和结构特点

    在日常生活中，室内飞扬的微粒灰尘是不易被看见的，但在暗的房间中若有一束 光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这是光学上的丁达尔现象。暗视野显微镜就是利用此原理设计的。它的结构特点主要是使用中央遮光板或暗视野聚光器，常用的是抛物面聚光器，使光源的中央光束被阻挡．不能由下而上地通过标本进入物镜。从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散 射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像．并非物体的本身，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构。但被检物体为非均质时，并大于1／2波长，则各级衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察物体的构造。一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004um以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2um)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细 胞内微粒的运动等。
(二)制作中央遮光板
    普通显微镜只要聚光器是可以拆卸的，支架的口径适于安装暗视野聚光器，即可改装成暗视野显微镜。在无暗视野聚光器时，可用厚黑纸片制作一个中央遮光板，放在普通显微镜的聚光器下方的滤光片框上，也能得到暗视野效果。
    (1)．将显微镜聚光器调到最高位置，用低倍镜对好焦距。
    (2)．取下目镜，从镜筒中观察并调节光阑的大小，使其与镜筒中所见物镜的视野相等。
(3)．用厚黑纸剪制中央挡光板。外圈直径与滤光片框架相同，中央部分的大小与调节好的光阑孔径一样(可用半透明的小纸片，放在通光孔处聚光镜镜面上，纸上显示的光斑即为光阑的孔径，再用圆规量取大小)。
(4)．将中央挡光板放在滤光片框架上，开大光阑进行样品观察。
　　如需使用高倍镜作暗视野观察，应按高倍镜对焦后的视野大小重新制作中央挡光板。
保存好各自制作的中央遮光板，以便在后面的实验中使用。
   图示中央遮光板
a．光圈孔径
b．滤光片直径
（三）使用方法
(1)．把暗视野聚光器装在显微镜的聚光器支架上。
(2)．选用强的光源，但又要防止直射光线进入物镜，所以一般用显微镜灯照明。
(3)．在聚光器和标本片之间要加一滴香柏油，目的是不使照明光线于聚光镜上面进行全反射，达不到被检物体，而得不到暗视野照明。
(4)．升降集光器，将集光镜的焦点对准被检物体，即以圆锥光束的顶点照射被检物。如果聚光器能水平移动并附有中心调节装置，则应首先进行中心调节，使聚光器的光轴与显微镜的光轴严格位于一直线上。
(5)．选用与聚光器相应的物镜，调节焦距＜操作方法与普通显微镜相同＝，找到所需观察的物像。（四）观察观察示教台上暗视野显微镜下的活细胞。在黑暗的背景里，可见细胞、细胞核和细胞器的衍射光图像。